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鎳Ni柱L00666進(jìn)行蛋白純化的原理與使用方法

鎳Ni柱L00666是大家在蛋白純化中，應(yīng)用較多的一種純化柱料，屬于固定化金屬離子親和色譜中的一種，1975年由Porath等發(fā)明，其間不斷完善發(fā)展至今。過渡金屬通過與電子供體配基上，能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負(fù)性元素（O，N），形成較穩(wěn)定的金屬螯合物。在IMAC中，一個(gè)Ni2+有六個(gè)配位位點(diǎn)，被含有3，4或5個(gè)電子供體基團(tuán)（配位位點(diǎn)）的螯合物固定在吸附劑上，而剩下未被占據(jù)的位點(diǎn)暴露于溶液中，能與組氨酸，半胱氨酸，和色氨酸的側(cè)鏈或組氨酸標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合。IMAC...

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想用好eStain L1蛋白染色儀，這6步驟可不能少！

eStainL1蛋白染色儀操作簡(jiǎn)便，將凝膠用凝膠固定夾固定后放入儀器內(nèi)，儀器將自動(dòng)注入染色液以及脫色液，在儀器的正負(fù)極之間形成一個(gè)很高的電場(chǎng)。在電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)下，負(fù)極濾紙中帶有負(fù)電荷的考馬斯藍(lán)染料分子發(fā)生定向移動(dòng)，與膠上的蛋白分子結(jié)合，完成染色過程。未結(jié)合的染料分子繼續(xù)移動(dòng)，離開膠，完成脫色過程。具體操作步驟：步驟1：當(dāng)您的凝膠電泳快結(jié)束時(shí)，打開eStainL1蛋白染色儀背部的開關(guān)，同時(shí)儀器蜂鳴，此時(shí)，儀器進(jìn)行開機(jī)自檢，自檢結(jié)束后主屏幕下方燈亮。步驟2：在托盤中注入適量蒸餾水，以*...

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親和層析介質(zhì)的工作原理是怎樣的？

親和層析是一種根據(jù)生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過這種可逆的結(jié)合和分離來達(dá)到蛋白純化的目的。生物分子與親和層析介質(zhì)上的配體通過共價(jià)鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發(fā)生生物學(xué)專一性結(jié)合形成復(fù)合物，共價(jià)鏈接在載體表面的功能團(tuán)配體上。蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)通過目標(biāo)蛋白質(zhì)與配體間通過特異性親和力吸附而達(dá)到分離純化的目的，具有生物專一性的特點(diǎn)，純化效率高。親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理，將...

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依科賽胎牛血清FSP500試用后常見的問題

客戶在收到依科賽胎牛血清FSP500后的需立即確認(rèn)胎牛血清有無異常，如血清有沒有出現(xiàn)融化情況、瓶口及瓶身有無出現(xiàn)碎裂、瓶口是否密封完整等情況。血清融化方法：建議產(chǎn)品使用梯度溶解法，將血清從-20℃冰箱取出后，于2-8℃解凍過夜，并在此過程中不時(shí)輕輕搖動(dòng)使之溶解均勻。那么，細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的黑點(diǎn)是污染嗎？更換依科賽胎牛血清FSP500后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞鏡下觀察有黑點(diǎn)，需要肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)液有無混濁的情況出現(xiàn)，其次鏡下觀察細(xì)胞中的黑點(diǎn)是否有游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就...

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AusgeneX澳洲胎牛血清使用前需要離心嗎？

血清的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當(dāng)也可能會(huì)導(dǎo)致血清質(zhì)量下降，造成細(xì)胞培養(yǎng)效果不理想。AusgeneX澳洲胎牛血清很珍貴，大家在血清使用時(shí)怎樣確定血清使用濃度？這個(gè)只能通過測(cè)試了。原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔。部分細(xì)胞原代提取時(shí)會(huì)使用20%血清，大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時(shí)會(huì)使用5%～10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度，還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖鰷y(cè)試和調(diào)整。血清使用前需要離心嗎？這個(gè)問題有以下兩種可能：其一，因?yàn)檠迦?..

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您真的會(huì)使用eBlot L1快速濕轉(zhuǎn)儀嗎？

eBlotL1快速濕轉(zhuǎn)儀是用來轉(zhuǎn)印蛋白的儀器，電泳轉(zhuǎn)印為轉(zhuǎn)移蛋白常用的方法，該技術(shù)有效、迅速，并且使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。在凝膠中向印跡膜載體轉(zhuǎn)印分離的蛋白質(zhì)的過程，即是電泳轉(zhuǎn)印法。因?yàn)榇思夹g(shù)往膜上轉(zhuǎn)印蛋白GX、快速和準(zhǔn)確，并且能夠使得蛋白在凝膠中保持高分辨率，在轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)中得到廣泛的應(yīng)用。eBlotL1快速濕轉(zhuǎn)儀準(zhǔn)備工作：1、準(zhǔn)備對(duì)緩沖液進(jìn)行轉(zhuǎn)移，緩沖液的pH值.不要無故調(diào)整，如果儀器過熱出錯(cuò)，那么可能選擇了不適合的緩沖液。2、通電以后，凝膠在轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡，平衡...

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澳洲胎牛血清的正確存放與解凍的方法總結(jié)

澳洲胎牛血清的正確存放與解凍是各位實(shí)驗(yàn)家尤為關(guān)注的一個(gè)問題，在保證質(zhì)量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法總結(jié)如下：1、澳洲胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃的冰箱使之全融。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則的搖晃均勻；2、長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下存儲(chǔ)血清，避免反復(fù)凍融。3、建議血清硬保存在-20℃條件下。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過1個(gè)月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜?..

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關(guān)于澳洲胎牛血清，有什么是我們不知道的

胎牛血清作為細(xì)胞生長*的重要營養(yǎng)來源一直備受科研人員重視，那么澳洲胎牛血清在參與細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)都發(fā)揮著什么作用呢？胎牛血清，是胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必需...

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