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親和層析介質的工作原理是怎樣的?

更新時間:2022-09-05點擊次數:1279
  親和層析是一種根據生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法,如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的,通過這種可逆的結合和分離來達到蛋白純化的目的。
  
  生物分子與親和層析介質上的配體通過共價鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發生生物學專一性結合形成復合物,共價鏈接在載體表面的功能團配體上。
  
  蛋白質親和層析技術通過目標蛋白質與配體間通過特異性親和力吸附而達到分離純化的目的,具有生物專一性的特點,純化效率高。
  
  親和層析是應用生物高分子與配基可逆結合的原理,將配基通過共價鍵牢固結合于載體上而制得的層析系統。這種可逆結合的作用主要是靠生物高分子對它的配基的空間結構的識別。
  
  常用的生物親和關系有酶-底物、底物類似物、抑制劑、激活劑、輔因子,抗體-抗原,激素-受體蛋白、載體蛋白,外源凝集素-多糖、糖蛋白、細胞表面受體,核酸-互補核苷酸序列、組蛋白、核酸結合蛋白等,具有高效、簡單、快速的優點,是當前理想的分離純化蛋白的方法。
  
  親和填料由三個部分組成的,主要是多孔球形基架,間隔臂及配基,根據配基特異性的不同親和填料分幾種,Ni柱純化,GST親和層析介質,麥芽糖結合蛋白和ProteinL親和層析介質等。
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