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簡單聊聊鎳Ni柱L00666的原理及其使用

更新時間:2021-10-25點擊次數:3388
  鎳Ni柱L00666是將Ni NTA金屬螯合層析介質裝填于層析柱中的即用型親和層析柱,省去了自行裝填層析柱的麻煩和柱效不高的風險,介質和層析柱的結合使層析變得高效簡單。
  
  金屬離子Ni2+預先螯合在以NTA為配基的瓊脂糖凝膠上,具有吸附容量大、選擇性好、易于再生、成本低等優點,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質及多肽的分離純化,尤其是組氨酸標記蛋白質的高效純化。
  
  鎳Ni柱的原理是過渡金屬通過與電子供體配基上,能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負性元素(O,N),形成較穩定的金屬螯合物。在IMAC中,一個Ni2+有六個配位位點,被含有3、4或5個電子供體基團(配位位點)的螯合物固定在吸附劑上,而剩下未被占據的位點暴露于溶液中,能與組氨酸,半胱氨酸,和色氨酸的側鏈或組氨酸標簽的蛋白特異性結合。
  
  鎳Ni柱L00666的使用:
  
  鎳Ni柱的洗脫通常采用競爭洗脫,先用低濃度的咪唑將雜蛋白和結合不牢的蛋白洗去,再用合適的濃度將目的蛋白洗脫。洗脫的先后順序與蛋白的結合能力相關。
  
  另外,在鎳Ni柱的使用中,應當避免緩沖液中存在還原劑和螯合劑,以免Ni2+被還原而脫落。如果柱料使用太久積累了很多雜蛋白,可用EDTA將Ni2+螯合下來,再用NaOH清洗柱料后,重新螯合Ni離子,即可完成再生。鎳Ni柱L00666不用時,應保存在20%乙醇中防止長菌。
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